1、I C S 6 7.1 2 0.1 0X 2 2卜rJ，月、竺 竺，.P i D B1 3省 地 方 标准DB 1 3/T 1 2 3 8-2 0 1 0速冻机削(切)牛、羊肉片2 0 1 0-0 5-1 0 发布2 0 1 0-0 5-2 5 实施河 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发布DB1 3/T 1 2 3 8-2 0 1 0月 Ij舀本标准按照G B/T 1.1-2 0 0 9 给出的规则起草。本标准由邢台市质量技术监督局提出。本标准由河北省食品标准化技术委员会归口。本标准起草单位:邢台市标准化协会、邢台市质量技术监督局桥东区分局。本标准主要起草人:谢群英、田文阁、郭少英、范淑敏
2、、傅 锋、刘荣琴。DB 1 3/T 1 2 3 8-2 0 1 0速冻机削(切)牛、羊肉片范围 本标准规定了 速冻牛、羊肉 片的要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输及贮存。本标准适用于以速冻生牛、羊肉为原料，经过切片、整理、速冻、包装制成的速冻牛、羊肉片(以下简称肉片)。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B 2 7 0 7 鲜(冻)畜肉卫生标准 G B 2 7 6 2 食品中污染物限量 G B 2 7 6 3 食品中农药最大残留限量 G B/T
3、 5 0 0 9.1 1 食品中总砷及无机砷的测定 G B/T 5 0 0 9.1 2 食品中 铅的测定 G B/T 5 0 0 9.1 5 食品中锅的测定 G B/T 5 0 0 9.1 7 食品中总汞及有机汞的 测定 G B/T 5 0 0 9.3 3 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 G B/T 5 0 0 9.4 4 肉与肉 制品卫生标准的 分析方法 G B/T 5 0 0 9.1 2 3 食品中铬的测定 G B/T 6 3 8 8 运输包装收发货标志 G B/T 6 5 4 3 运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱 G B 7 7 1 8 预包装食品标签通则 G B/T 9 6 9 5.1
4、9 肉与肉制品 取样方法 G B/T 9 9 6 1 鲜、冻胭体羊肉 G B/T 1 7 2 3 8 鲜、冻分割牛肉 G B 1 8 3 9 4 畜禽肉水分限量 G B 1 8 4 0 6.3 农产品安全质量 无公害畜禽肉 产品安全要求 G B/T 2 0 9 4 0 肉 类制品企业良 好操作规范 N Y 1 1 6 5 羔羊肉 J J F 1 0 7 0 定量包装商品净含量计量检验规则 定量包装商品 计量监督管理办法国家质检总局(2 0 0 5)第7 5 号令 (食品标识管理规定国 家质检总局(2 0 0 7)第1 0 2 号令 动物性食品中兽药残留最高限量农业部2 0 0 2 年第2 3
5、5 号公告3 要求3.1 原料要求3.1 .13.1 .2原料肉应来自非疫区，并持有当地动物防疫监督机构出具的检疫证明。原料肉的污染物限量应符合 G B 2 7 6 2的规定。DB1 3/T 1 2 3 8-2 0 1 03.1.3 原料肉的水分应符合G B 1 8 3 9 4的规定。3.1.4 原料羊肉的卫生标准应符合G B 2 7 0 7 规定的要求，原料质量应符合G B/T 9 9 6 1 规定的要求。羔羊肉应符合N Y 1 1 6 5 规定的要求。3.1.5 原料牛肉的卫生标准应符合 G B 2 7 0 7 规定的要求，原料质量应符合G B/T 1 7 2 3 8中胭体牛肉各种部位品种
6、的要求。3.2 感官要求 感官要求应符合表 1 的规定。表1 感官要求项目要求形 状色 泽肌肉 呈红色，有光泽，脂 肪呈白 色或淡 黄色。组织形态片与片的间无粘连、肌纤维致密。粘 度切面光滑、不粘手。气 味具有牛、羊肉固有的气味，无异味。煮沸后肉汤澄清透明，脂肪团聚 集于 表面，具 有该品 种固 有的味道。肉眼可见异物无脆骨、硬骨及血管、脏器、淋 巴、毛、绒。其他杂质不得检出。3.3 理化指标 理化指标应符合表2 的规定。表2 理化指标项目指标解冻失水率毛1 0%包装中心温度一 巧 挥发 性盐基氮/(m g/1 0 0 g)(应符合G B 2 7 0 7 的规定总 汞(以 H g 计)/(m
7、g/k g)铅(以 P b 计)/(m g/k g)无 机砷(以 A s 计)/(m g/k g)锡(以 C d 计)/(m g/k g)铬(以 C r 计)/(m fg)应符合G B 2 7 6 2 的规定亚硝 酸盐(以 N a N O 2 计)/(m 留 kg)_ 6,0 0 0 X g (8,0 0 0 r p m)离 心1 分钟，并 将收 集管 及 滤液丢弃。D B1 3/T 1 2 3 8-2 0 1 0A.1.5.2.8将离 心 管柱套 入新的 收集 管，注入 A W1 试 剂5 0 0 5 L 到离心 管柱，以 6,0 0 0 X g (8,0 0 0r p m)离 心1 分 钟
8、后，将收 集管 及滤 液丢弃。A.1.5.2.9将离 心 管柱套 入新的 收集管，注入 A W 2 试剂5 0 0 g L 到离 心管柱，以 2 0,0 0 0 X g (1 4,0 00 r p m)离 心3 分钟 后，将收集 管 及滤液丢 弃。A.1.5.2.1 0 将离心管柱套入新的1.5 m L 离心管。A.1.5.2.1 1 加入A E 试剂1 0 0 5 L 至离心管柱，于室温下静置1 分钟后，再以 _ 6,0 0 0 X g (8,0 0 0 r p m)离心1 分钟，再重复此溶出步骤一次。A.1.5.2.1 2 将溶出液(约2 0 0 p L)收集至己灭菌的1.5 m L 离心
9、管，为萃取D N A 原液。A.1 .5.2.1 3 依2.6.3.2.节测量D N A 浓度并记录后，置于一 2 0 冷冻保存。注8:抽取脾 脏等含细胞数量呆多的组织D N A，称取量不可 超过1 0 m g。抽取肝脏或肾脏等含丰富 R N A 的组织D N A,于步骤2.6.2.4.的后加入R N a s e (1 0 0 m g/m L)4 5 L,混合均匀后于室 温下静置2 分钟。A.1 .5.31.5.31.5.3AA(0.D.)/0.D.:，。D N A 浓度测定及纯度判断1 检体D N A 溶液于使用前自 冷冻库中取出，于室温下进行溶解。2 取适当量的D N A 溶液以无菌纯水做
10、适当倍数的稀释，分别测定2 6 0 n m及2 8 0 n m的吸光值。计算D N A 浓度系以 O.D.26 0 吸光值乘5 0 n 留 5 L 即为D N A 溶液浓度。D N A 溶液纯度则以 0.D.2 60 比值作判断，其比值应介于1.7-2.0 间。A.1.6 鉴别试验 注 9)P C R 操作步骤 以无菌纯水适当稀释 D N A溶液、引子备用。取P C R反应管，并依照 2.5.5.1.节配制P C R溶液，依 序加入 无 菌纯水、1 0 倍P C R 缓冲 溶液、d N T P、引子、D N A p o ly m e r a s e 及D N A 溶液，混 合均 匀后，将反应管
11、置于离心机瞬间离心，使混合液聚集于反应管的底部。移入P C R反应器，依据引子类别并参照节设定反应条件，进行反应，结束后，取出P C R增幅产物，进行电泳分析。A.1.6.2 P C R 条件表 P C R条件步骤温度时简1.最初变性9 5 5 mi n2.变性9 5 0C3 0 s e c3.接测试动物类基因6 00C3 0 s e c测试哺乳类及家禽类基因5 40C3 0 s e c测试焦类基因6 0 0C3 0 s e c4.延展7 2 0C3 0 s e c5.最终延展7 2 0C7 mi n步骤 2 至步骤4，共进行4 0 个循环反应。胶片 电泳分析 取适量的6 倍载入胶片缓冲溶液，
12、分别与无菌纯水(空白组)及 P C R增幅产物混合均匀，注入2%胶片孔中，以5 0 或1 0 0 伏特电压进行电泳。同时，必须取D N A分子量标记物质进行电泳，作为P C R增幅产物大小的判别与计算依据。经电泳后的胶片置入胶片染液中进行染色约 1 5分钟，续置入水中漂 DB1 3/T 1 2 3 8-2 0 1 0洗及褪染，再置于紫外灯箱上，以波长3 6 5 a m的紫外光照射观察是否有明显的D N A荧光判，并判读桔果。每次实验必须同时测试正反应及负反应对照组。A.1.6.4 鉴别A.1.6.4.1 A l 试动物类基因:检体D N A的P C R 增幅产物电泳结果，须与正反应对照组及D
13、N A分子量标记物质的电泳结果进行相互比对，当检体D N A与正反应对照组D N A二者皆出现P C R增幅产物，且经由D N A分子量标记物 质 估 算P C R 增 幅 产 物 大 小 介 于2 3 4-2 6 5 b p 者 a 1 0)，即 判 定 该 检 体 含 有 动 物 性 成 分。A.1.6.4.2 测试哺乳类及家禽类基因:检体D N A的P C R增幅产物电泳结果，镇与正反应对照组及D N A分子量标记物质的电泳结果进行相互比对，当检体D N A与正反应对照组D N A二者皆出现P C R增幅产物，且经由D N A分子量标记物 质估 算P C R 增幅 产物大小 为9 7 b
14、 p者，即 判定该 检体 含 有哺乳 类或 家禽 类动物 性成 分。A.1.6.4.3 测试焦类基因:检体D N A的P C R增幅产物电泳结果，须与正反应对照组及D N A分子量标记物质的电泳结果进行相互比对，当检体D N A与正反应对照组D N A二者皆出现P C R增幅产物，且经由D N A分子量标记物质估算P C R增幅产物大小为2 3 4 b p者，即判定该检体含有焦类动物性成分。注 9:P C R 鉴别试验结果的判读系以 P C R 增幅产物大 小判定，当 测试结果判读困难时，建议进行确认试 验。本P C R 定性反应条件系采A B I P R I S M 9 7 0 0 设定的，
15、当 使用其他机型时，应自 行检讨反应条件。注1 0:动物类基因的 P C R 增幅产物大小介于2 3 4-2 6 5 b p者，皆 为正反应。A.1.7 确认试验:本实验视需要而操作的。A.1 .7.1 R T-P C R 操作步骤A.1 .7.1 .1 R T-P C R-A B I P R I S M 7 7 0 0 S e q u e n c e D e t e c t o r 以 无菌纯水适当稀释检体D N A溶液、引子及探针备用。取适量无菌纯水，并依照2.5.5.2.节配制P C R 溶液，依 序加入M a s t e r M i x、稀 释过的 引子 及 探针，混合 均匀后，分装2
16、 0 5 L 入P C R 反 应管中，再 各 别 加入 稀释 过的 检体D N A溶 液5 5 L，最 后 将P C R 反 应管 置于 离心 机中，以2 0 0 X g(1,5 0 0 r p m)瞬间离心，移入 R T-P C R反应器，依下列条件进行反应。每次实验皆镇制作负反应及正反应对照组。表 2R 下 一 P C R 操作步骤步骤温度时r-71.热活化5 0 0 C2 mi n2.最 初变性9 5 0 C1 0 mi n3.变性9 5 0 C1 5 s e c4.接、延展测试动物类基因6 0 0 C1 mi n测试哺乳类及家禽类基因5 4 0 C1 mi n测试焦类基因6 0 0 C1 mi n5.冷却3 5 0 C4 5 s e c步骤3 至步骤4，共进行4 5 个循环反应。A.1 .7.1 .2 R T-P C R-R o c h e L i g h t C y c l e r 以无菌纯水适当稀释检体D N A溶液、引子及探针备用。取适量无菌纯水，并依照2.5.5.3.节配制P C R 溶液，依 序加入L i g h t C y c le r-F a s t S t a
