1、1CS67.120B45中华人民共和国国家标准农业部1025号公告一11一2008猪尿中B一受体激动剂多残留检测液相色谱一串联质谱法Determination of B-agonists residues in pig urineby liquid chromatography-tandem mass spectrometry2008-04-29发布2008-04-29实施中华人民共和国农业部发布农业部1025号公告一11一20084.2.11标准储备液(100以g/L):准确称取适量的盐酸克仑特罗、盐酸莱克多巴胺、沙丁胺醇和西马特岁对照品，按克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和西马特罗计，用甲醇
2、分别配制成100g/L的标准储备液，一20冰箱中保存，有效期为3个月。4.2.12混合标准储备液(1ug/L):分别准确量取1.0mL的克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特岁标准储备液至100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，一20冰箱中保存，有效期为3个月。4.2.13同位素内标储备液(100g/mI):准确称取适量的盐酸克仑特罗-D、盐酸莱克多巴胺D、沙丁胺醇-D和西马特罗-D对照品，按克仑特罗-D、莱克多巴胺D、沙丁胺醇-D和西马特罗-D,计，用甲醇配制成100g/L的标准储备液，一20冰箱中保存，有效期为3个月。4.2.14同位素内标工作液(100g/mL):分别准确量取适量的同位素内
3、标储备液至同一容量瓶中，用甲醇稀释定容成浓度为100g/mL的同位素内标工作液，一20下冰箱中保存，有效期为3个月。4.3仪器和设备4.3.1高效液相色谱申联质谱仪（配电喷雾离子源）。4.3.2漩涡振荡器。4.3.3电热恒温振荡水槽。4.3.4pH计。4.3.5旋转蒸发仪。4.3.6固相萃取装置。4.3.7 Oasis MCX固相萃取柱(60mg/3mL)或相当者。4.3.8氮吹仪。4.3.9微孔滤头：0.45m。4.4测定步骤4.4.1试样的制备试样的制备包括：一取摇匀的供试样品，作为供试试样；取摇匀的空白样品，作为空白试样：取摇匀的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样。4.
4、4.2酶解准确量取5mL尿样于50mL离心管内，加入0.5mL2mol/L的乙酸铵缓冲液(pH=5.2),冉加入404L的3-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀，于37下避光水浴振荡16h。4.4.3提取酶解后，添加100L100ng/mL内标物于待测样品中，涡旋混匀，l0000r/min高速离心10min,转移上清液于另一50mL离心管内，用5mol/L的NaOH溶液调pH至9.8士0.2，加入10mL异丙醇-乙酸乙酯(6十4)，再加人1.5g一2g的周体氯化钠饱和水相，涡旋后振摇10min,5000r/min离心l0min,取上清液于50mL鸡心瓶内，再用10mL异丙醇-乙酸乙酯(6十4)重复提取一次，合并上清液，50下旋转蒸千，用5mL2mol/L的乙酸铵溶液(pH=5.2)溶解，备用。4.4.4净化MCX柱子依次用3mL甲醇，3ml.水活化，取备用液全部过柱，再依次用3mL水、3ml.2%的甲酸水溶液、3mL甲醇淋洗，减压抽干，州5mL5%的氨水甲醇溶液洗脱；洗脱液在50下用氮气吹干。残余物用0.5mL的甲醇-0.1%甲酸/水(5+95)溶解，过滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定。4.4.5标准曲线的制备2
