1、 关注食品安全，探讨食品技术。关注食品安全，探讨食品技术。汇聚行业英才，推动行业发展。汇聚行业英才，推动行业发展。-食品资讯 法律法规 食品技术 质量体系 检验技术 食品标准 食品资料 仪器设备 食品图库 食品安全 食品人才 专业英语 食品网刊 食品课堂 食品专题 食品网址 食品论坛 食品家园 考试中心 培训中心 食品词典 食品书店 食品百科 数据库 行业知道-GB/T 5413系列标准汇编（1997版）GB/T 5413系列标准汇编（1997版）此标准汇编由食品伙伴网整理完成，欢迎下载。本汇编共收录1997版的GB/T 5413系列标准32个，pdf格式，有书签方便查看，共计144页。免责声
2、明：本汇编中收集的所有标准均来源于互联网，仅供食品同行交流学习,请勿作他用，本站不承担任何技术及版权问题。如有疑问请与我们联系：，QQ:363986600.I CS 6 7X 8 21 0 0.1 0中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B/T 5 4 1 3.1 一 1 9 9 7婴幼儿配方食品和乳粉 蛋白质的测定Mi l k p o w d e r a n d f o r mu l a f o o d s f o r i n f a n t a n d y o u n g c h i l d r e n-De t e r mi n a t i o n o f p r o t e i
3、 n1 9 9 7-0 5-2 8 发布1 9 9 8-0 9-0 1 实施国家技术监督局发 布食品伙伴网http:/G B/T 5 4 1 3.1 一1 9 9 7前曰 纽 旨下 J 本标准仅对G B 5 4 1 3-8 5 中A.3 章“半微量凯氏定氮法”的文本格式进行了 修改，内容未做改动。本系列标准从实施之日 起，代替G B 5 4 1 3-8 5 本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草
4、人:王芸、黄敏、李玉贤。食品伙伴网http:/中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准婴 幼 儿 配 方 食 品 和 乳 粉G B/z 5 4 1 3.1 一1 9 9 7蛋 白 质 的 测 定代替 G B 5 4 1 3-8 5Mi l k p o w d e r a n d f o r mu l a f o o d s f o r i n f a n t a n d y o u n g c h i l d r e n -D e t e r mi n a t i o n o f p r o t e i n范围本标准规定了蛋白质的测定方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中蛋白质的测定。方法
5、提要 在加热时，硫酸分解成亚硫酸醉、水和氧。有机物被氧化为二氧化碳和水，而蛋白质的氨态氮与过量硫酸反应转变为硫酸按，硫酸钱在碱性溶液中进行蒸馏。将蒸馏出来的氨用硼酸吸收，再用酸标准溶液滴定。试荆 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1 浓硫酸。3.2 硫酸钾。3.3 硫酸铜。3.4 过氧化氢溶液:体积分数为 3 0%,3.5 硼酸溶液:c(H3 B 0 3)为3 0 g/L。取3 0 g硼酸，溶解在 1 L水中。3.6 甲 基红一 澳甲 酚绿混合指示剂:用体积分数为9 5%的乙 醇，将澳甲酚绿及甲 基红分别配成l g/L的乙 醇溶液，使用时按l
6、g/L澳甲酚绿:l g/L甲 基红为5:1 的比例混合.3.7 硫酸标准溶液:c (H十)为。.0 5 0 0 m o l/L。取3 m L浓硫酸加到1 5 m L水中，冷却后洗入1 0 0 0 m L容量瓶中，定容。3.8 氢氧化钠溶液，质量比为4 0 0/1 0 0 0,称取4 0 0 g氢氧化钠，用1 0 0 0 m L水溶解，待冷却后移入试剂瓶中。仪器 常用实验室仪器及:4.1 凯氏烧瓶:5 0 0 mL或2 5 0 mL,4.2 定氮蒸汽蒸馏器。4.3 滴定管:2 5 mL,4.4 三角烧瓶:2 5 0 mL,国家技术监誉局 1 9 9 7 一 0 5 一 2 8 批准1 9 9 8
7、 一 0 9 一 0 1 实施食品伙伴网http:/G B/T 5 4 1 3.1 一 1 9 9 75 操作步骤5.1 样品的制备 将样品全部移入约两倍于样品体积的洁净干燥容器中，立即盖紧容器，反复旋转振荡，使样品彻底混合均匀。5.2 测定5.2.1 称取样品2 g，精确至0.2 m g，放入凯氏烧瓶(4.1)中，加入l O g 硫酸钾(3.2)和l g 硫酸铜(3.3)，量取2 O m L浓硫酸(3.1)，徐徐加入凯氏烧瓶中，混合。注 1 加入样品及试剂时，避免粘附在瓶颈上。2 加入硫酸 钾的作用:提高硫酸的沸点(3 3 8 t),增进反应速度.l O g 硫酸钾将沸点提高到 4 0 0
8、t，但过多的硫酸钾 会造成沸点太高，生成的硫酸氢按在 5 1 3 会分解。3 加入硫酸银的作用:作催化剂，使氧化作用加速。5.2.2 凯氏烧瓶的瓶口 放一小漏斗，用微火加热(小心瓶内泡沫冲出而影响结果)，当瓶内发泡停止，稍加大火力。同时，可分数次加入l O m L过氧化氢溶液(3.4)(但必须将烧瓶冷却数分钟以后加入)。当烧瓶内容物的颜色逐渐转化成透明的淡绿色时，继续消化 0.5 一 l h(若凯氏烧瓶壁粘有碳化粒时，进行摇动或待瓶中内容物冷却数分钟后，用过氧化氢溶液冲下，继续消化至呈透明为止)。然后取下并使之冷却。5.2.3 将橙清的消化液小心移入1 0 0 mL容量瓶中，以水洗三次凯氏烧瓶
9、，洗涤液并入上述容量瓶中，冷却后稀释至刻度并摇匀。5.2.4 吸取2 5 mL消化液于定氮蒸馏器中，在冷凝器的下端放置一个盛有 5 O m L硼酸溶液(3.5).3 滴甲基红一 溟甲酚绿混合指示剂(3.6)的2 5 O mL锥形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在液面以下。将 2 5 m L氢氧化钠溶液慢慢地加入蒸馏瓶中(溶液应呈强碱性)，迅速将塞子塞好，然后通入蒸汽进行蒸馏，蒸至液面达1 5 O m L时，提出 冷凝器下端的玻璃管，用蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并聚集于硼酸溶液中，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，出液口在2 0 0 m L 刻度线以上，继续蒸馏，蒸至液位达2 0 0 m L,注:燕馏时要注
10、意蒸馏情况，避免瓶中的液体发泡冲出，进入接受瓶.火力太弱，蒸馏瓶内压力减低，则接受瓶内液 体会倒流，造成实验失败.5.2.5 用硫酸标准溶液(3.7)滴定至溶液出现酒红色为止，记录所用硫酸标准溶液的体积。同时进行空白试验，并在结果中加以校正。6 分析结果的表述 L ，_ _。*。，_ _ _、(V一 V)X c(H十)X 2X 0.0 1 4X F、._ _ _ 赫中蛋白质含量(g/1 0 0 g)=一x1 0 0 .(1)二，.二 曰，、0，-一。，2 5 从 X一 于士 一 1 0 0式中:V 滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mL ;V o 空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，m L ;c(H)
11、硫酸标准溶液中H 十 的浓度，m o l/L;m样品的质量，9;0.0 1 4-氮原子的摩尔质量，k g/m o l ;F-氮换算为蛋白质的系数。乳粉为6.3 8，纯谷物类(配方)食品为5.9 0，含乳婴幼儿谷物 (配方)食品为6.2 5,注:空白实验仅不加入样品，操作步孩与样品相同。食品伙伴网http:/G B/T 5 4 1 3.1 一 1 9 9 77 允许差同一样品的两次测定值之差不得超过平均值的 1.5%.食品伙伴网http:/GB/T 5 4 1 3.2-1 9 9 7自 ii言 本标准参考了日本森永公司的乳清蛋自测定方法。本系 列标 准 从实施 之日 起，代什G B 5 4 1
12、3-8 5 本标准山中国轻_ 卜 总会提出。本标准山全国乳.甘.标准化中心归日。本标准负责起草单位:哈尔滨森水乳，。有限公司、国家乳制.甘.质量监督检验中心。本标准参加起草单 位:PL 部食.V,U I 生监督检验所、浙江省轻 业研究所、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准卞要起草人:几 丽坤、张燕杰、赵勤。食品伙伴网http:/中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准婴 幼 儿 配 方 食 品 和 乳 粉G B/T 5 4 1 3.2-1 9 9 7乳 清 蛋 白 的 测 定代并 GB 5 4 1 3-8 5Mi l k p o v Ae r a n d f o r mu l a f o
13、o d s f o r i n f a n t a n d y o u n g c h i l d r e n -De t e r mi n a t i o n o f wh e y p r o t e i n范围本标准规定了酪蛋自 J 乳清蛋白含量比率的测定方法。本标准适用 几 婴幼儿配方食.1 1it.和乳粉中酪蛋白与 乳清蛋自含量比率的测定。方法提要 试样用S D S-聚苯烯酸胺凝胶电 泳(S D S-P A G E,L a e m m l i 法)后，用光密度计对按分子量顺序分离开的酪蛋白 J 乳清蛋自各谱带进行测定，求得酪蛋白与乳清蛋自的含量比率。试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分
14、析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1 电泳缓冲液:将T r i s (h y d r o x y m e t h y l)a m i n o m e t h a n e 7.5 g、甘胺酸3 6 g,S D S 2.5 g溶J,-A馏水中，定容至5 0 0 M L。使用前以蒸馏水稀释5 倍后使用。3.2 S D S试样缓冲液:0.1 2 5 m o l/L T r s i 一 盐酸(p H 6.8)，体积分数2 0%的甘油，4 Y o(m/V)S D S，体积分数 I O y o 2-m e r c a p t o e t h a n o l，质量分数0.0 0 2 5%的
15、浪酚蓝(b r o m o p h n o l b l u e).3.3 染色剂:质量分数0.I%考马斯蔽R-2 5 0(C o o m a s s i c b r i l l i a n t b l u e R-2 5 0)，体积分数1 0%的甲醉，体积分数7.5%的乙酸.3.4 脱色剂:体积分数1 0%的甲醉，体积分数7.5%的乙酸。3.5 酪蛋白。3.6 精制乳清蛋I I (WP C).3.7 S D S-P A G E:用梯度凝胶(1 0%-2 0%)或同效凝胶。仪器 常用实验室仪器及:4.1 平板式电泳槽。4.2 供电设备。4.3 光密度计。操作步骤5.1 样液的制备 将试剂按蛋白
16、质 1 0-2 印9 爪L的浓度范围溶解在蒸馏水中。加入与 试样同体积的S D S试样缓冲国家技术监督局 1 9 9 7-0 5-2 8批准1 9 9 8-0 9-0 1实施食品伙伴网http:/GB/T 5 4 1 3.2-1 9 9 7液，在煮沸热水中静置 5 m i n 后，作为试样液。5.2 标准溶液的制条 使用前，酪蛋白 和乳清蛋白的蛋自 质浓度按凯氏(K j e l d a h l)法精确测定。将酪蛋自 和乳清蛋白按上述方法分别进行溶解和处理后作为标准溶液。此外，还可将酪蛋自与乳清蛋白的标准溶液按蛋白 质含量的任意比率(比如蛋自质的浓度比为7 5:2 5,5 0:5 0,2 5:7 5)进行混合作为混合标准溶液。53 电泳 将凝胶设置在电泳槽中，加入电泳缓冲液。试样溶液与 标准溶液的添加量为侮孔I 印L.电泳时间因电泳凝胶的种类不同而异.以l O%-2 0%的梯度复合凝胶进行电 泳时，定电流为4 0 n i A，时间为6 0 m i n.电泳结束时间可按浪酚蓝的蓝谱带到达离凝胶下端 5 m m时为标志。电泳结束后将凝胶放入染色液中振荡染色I h,然后转入脱色液中振荡脱色 1
