1、94江西中医药大学学报 2023 年 8 月第 35 卷第 4 期JOURNAL OF JIANGXI UNIVERSITY OF CM 2023 Vol.35 No.4实验研究生理学实验“10%NaCl 溶液对新西兰兔尿生成影响”在中医院校的实践与反思 崔艳茹 可红 刘婕 曾晓慧 王坚 王心怡 屈飞（江西中医药大学 南昌 330004）摘要 目的：观察注射10%NaCl溶液后新西兰兔尿量的变化，检验注射10%NaCl溶液对抗利尿激素（ADH）、醛固酮（ALD）、心房钠尿肽（ANP）的影响。方法：取 10 只健康成年新西兰兔，其中 7 只依次注射 0.5、1、2、4 mL 10%NaCl 溶液
2、，记录给药前后尿量的变化并于给药后 5 min 取血离心得到血浆样本，分析尿量变化及 10%NaCl 溶液给药量的相关性；用 ELISA试剂盒检测留取血浆中 ADH、ALD、ANP 的含量。其余 3 只依次注射 0.5、1、2、4 mL 生理盐水，观察尿量变化。结果：注射 0.5 mL 10%NaCl 溶液后新西兰兔尿量与给药前相比，未见显著差异（P0.05）。注射 1、2、4 mL10%NaCl 溶液后新西兰兔尿量明显增加，与各自注射前相比，有统计学意义（P0.05）。注射 0.5、1、2、4 mL 10%NaCl 溶液给药后 ADH 含量与正常组相比未见显著差异（P0.05），ANP 含量
3、与正常组相比亦未见显著差异（P0.05）；注射 4.0 mL 10%NaCl 溶液后 ALD 含量低于正常组，有统计学意义（P0.05).The urine output of New Zealand rabbits increased significantly after the injection of 1 mL,2 mL,and 4 mL of 10%NaCl solution,which was statistically significant compared with that before the respective injections(P0.05).After inje
4、ction of 0.5 mL,1 mL,2 mL,4 mL of 10%NaCl solution,there was no significant difference in the content of ADH compared with the normal group(P0.05),there was also no significant differencein the content ofANP compared with the normal group(P0.05).After injection of 4 mL of 10%NaCl solution,the conten
5、t of ALD was less than that of the normal group(P0.05).Conclusion:After the injection of 10%Nacl solution,the plasma ALD content decreased and the urine output of New Zealand rabbits increased.The trend was stable,which fully reflected the spirit of exploration and critical thinking of students in t
6、raditional chinese medicine.Key words 10%NaCl;Aldosterone;Urine Output基金项目：江西省教育厅科研项目（GJJ190658）。通信作者：屈飞，博士，教授。E-mail:。95陈颖等：彭涛从少阳论治胃癌前病变经验实验研究高钠血症是指血清钠离子浓度大于145mmol/L的电解质平衡紊乱状态1，常继发于其他危重疾病，如脑卒中等，使治疗难度明显加大并影响患者的预后2，合并高钠血症的脑血管病患者 30d内死亡率和并发症发生率均明显高于非高钠血症组3。高钠血症主要临床表现口渴和少尿，还会出现烦躁不安、共济失调、肌张力增高等4。日常生活中，
7、很多人有大汗淋漓的经历，和同学交流时，大家普遍反映大量出汗时尿少，从生理学的角度分析，可能与丢失水分过多、血浆渗透压升高、抗利尿激素（antidiuretichormone，ADH）分泌增加有关。近日，在江西中医药大学开展的“尿生成的影响因素”的实验教学中，我们设计给家兔注射2mL10%NaCl 复制高钠血症模型，期望得到尿量减少的实验结果，然而结果却是尿量增加的。为探究其中原因，本实验通过对新西兰兔静脉注射 10%NaCl 溶液复制高钠血症模型，明确注射 10%NaCl溶液后新西兰兔尿量的变化，观察注射 10%NaCl溶液对 ADH、醛固酮（aldosterone，ALD）、心房钠尿肽（at
8、rialnatriureticpeptide，ANP）含量的影响，以期揭示注射 10%NaCl 溶液影响尿量的原因，为学生解惑，也为相关研究提供些实验参考。1 材料与方法1.1 材料 健康新西兰兔 10 只，体重（2.360.26）kg，由湖南太平生物科技有限公司提供，动物质量许可证编号：SYXK（湘）2020-0005。饲养于江西中医药大学实验中心，动物随意进食进水，实验时设定温度 25。NaCl 购自天津市大茂化学试剂厂、乌来糖购自上海润捷化学试剂有限公司、ALDELISAKit 和 RabbitANPELISAKit 购自武汉菲恩生物科技有限公司、RabbitADHELISAKit 购自
9、南京建成生物科技有限公司、0.9%NaCl 注射液购自辰欣药业股份有限公司。1.2 称重及麻醉将新西兰兔称重，耳缘静脉注射 20%乌来糖（5mL/kg 体重）进行麻醉，前 1/3 速度略快，后 2/3速度慢，尤其是后 1/3 需要缓慢注射，避免麻醉意外。待注射到参考剂量时，观察新西兰兔肌张力下降、角膜反射迟钝、呼吸深慢、疼痛反射消失，方可手术。若未麻醉完全，追加小剂量至疼痛消失。待新西兰兔麻醉完成后，将其仰卧固定于兔手术台。1.3 膀胱插管术及颈总动脉插管术膀胱插管术：剪去下腹部手术区域的兔毛，提起下腹部正中皮肤，在耻骨联合上方组织剪一长45cm 正中切口，钝性分离结缔组织，轻提腹直肌，沿腹白
10、线切开腹直肌，即可见到膀胱。膀胱下翻。在膀胱与输尿管之间穿线，结扎膀胱尿道口。轻提膀胱，在膀胱顶部避开血管，切开膀胱，行膀胱插管。颈总动脉插管：剪去颈部手术区域的兔毛，在颈部正中做一长 57cm 切口，依次分离结缔组织、胸骨舌骨肌，充分暴露气管，找到颈总动脉，将其分离。用动脉夹夹紧近心端，在靠近远心端用眼科剪做一斜切口，将动脉插管插进颈总动脉，用细线扎紧。1.4 建立高钠血症模型观察尿滴数并取血膀胱插管观察尿滴数，待尿滴数稳定后，观察记录新西兰兔正常情况 10min 尿滴数，并颈总动脉插管取血 3mL，取血后通过耳缘静脉注射 3mL生理盐水补充血容量。接着，兔耳缘静脉依次注射 0.5、1、2、
11、4mL10%NaCl 溶液，每次给药后计数每 10min 的尿滴数，观察 30min。以给药前后 10min 尿滴数对比来观察尿量的变化。在每次给药后 5min 采取血液样本 3mL，取血后通过耳缘静脉注射 3mL 生理盐水补充血容量。将采集的血液样本立即进行离心（4，3000r/min，30min），吸取上清，分装，-20冰箱保存，待验。1.5 注射生理盐水并计数尿滴数待尿滴数稳定后，观察记录正常情况每 10min尿滴数，依次注射 0.5、1、2、4mL 生理盐水，每次给药后观察尿量 30min，统计并比较给药前后10min 的尿滴数。1.6 血浆样本的 ADH、ALD、ANP 的检测依据
12、ADH、ALD 和 ANP 检测依试剂盒说明书进行，于 450nm 波长处测量各样本吸光度。根据标准品浓度和 OD 值绘制标准曲线，将样本的 OD值代入标准曲线上，计算其浓度。1.7 统计学方法采用 SPSS19.0 统计学软件对所涉及组别进行统计学分析。各组别数据采用均数 标准差进行表示，多组别之间采用单因素方差分析（one-wayANOVA）进行比较，两组别资料采用两独立样本 t检验比较。应用 GraphPadPrism 进行 Pearson 分析。P0.05）。注射 1、2、4mL10%NaCl 溶液后 10min 的尿滴数与给药前 10min 相比较明显增加（P0.01），崔艳茹等：生
13、理学实验“10%NaCl 溶液对新西兰兔尿生成影响”在中医院校的实践与反思96江西中医药大学学报 2023 年 8 月第 35 卷第 4 期实验研究呈现剂量依赖性。见表 1。表1 注射10%NaCl前后尿量变化（xs，n=7）10%NaCl/mL给药前 10min 尿量/（滴10min-1）给药后 10min 尿量/（滴10min-1）0.59.572.7211.862.9519.712.7616.142.42*210.862.5944.8618.53*415.713.73111.7142.81*注：与同剂量10%NaCl给药前比较，*P0.01。2.2 尿滴数增长量与 10%NaCl 给药量
14、相关性分析 定义各组给药后 10min 较给药前 10min 尿量增加值为 D，当注射 0.5、1、2、4mL10%NaCl时，D 呈现增加趋势，拟合 D-10%NaCl 给药量趋势线，计算得到 R2=0.9872，P0.05）。注射 1mL、2mL10%NaCl 溶液后 10min 尿滴数均多于注射同剂量生理盐水后10min尿滴数（P0.05）。注射 4mL10%NaCl 溶液后 10min 尿滴数更明显高于注射同剂量生理盐水后 10min 尿滴数（P0.01）。见表 3。表3 注射同等剂量生理盐水和10%NaCl后尿量比较（xs）给药量/mL生理盐水/（滴10min-1）10%NaCl/（
15、滴10min-1）0.59.002.1611.862.95110.331.8916.142.42*210.331.2544.8618.53*412.670.94111.7142.81*注：与生理盐水组相比较，*P0.05，*P0.05）。注射 0.5、1、2mL10%NaCl 溶液后，ALD 含量与对照组相比，未见明显变化（P0.05）。注射 4mL10%NaCl 溶液后，ALD含量与对照组相比具有差异（P0.05）。见表 4。表4 注射10%NaCl溶液后ANP、ADH和ALD的含量变化（xs，n=7）pg/mL10%NaCl/mLANPADHALD0289.55124.5529.8115.
16、47716.47126.600.5305.9375.9130.6419.71650.40214.891284.3691.7328.686.61602.16134.582287.6481.9736.5316.74553.72198.454261.4363.5636.3121.97504.86115.85*注：与0 mL 10%NaCl组比较，*P0.05。3 讨论实验教学是高等中医药教育的重要组成部分，它可以把传统中医药理论与现代实验操作融合，提升学生的实践动手能力5。生理学是一门实验性学科，掌握生理学知识的关键就是要从各种实验获得6。在生理学的学习中，培养学生实验设计和实践能力、信息搜集能力和数据处理与分析能力，对于今后的中医药科研会打下坚实的基础。实验教学是培养中医药创新人才的重要环节，在实验方面钻研是打造具有高阶性、创新性、挑战度之金课的重要途径。设计实验，学生从教材上熟悉的理论知识及实验原理入手，当发现注射 2mL10%NaCl 后尿量增加的现象时，学生首先进行双向质疑，是实验操作不当还是另有原因。这一环节充分体现学生敢于质疑和提出问题的能力。组队查阅文献后发现，几乎所有文献都报
