1、中华 人 民共 和 国 国 家 标 准(6 3 3.，+6 3 3.8 5).0 0 1.4 粮食、油料检验 过氧化氢酶活动度测定法 I n s p e c t i o n o f g r a i n a n d o i l s e e d sM e t h o d s f o r d e t e r m i n a t i o n o f h y d r o g e n p e r o x i d a s e a c t i v i t y5 5 2 2-8 5本标准适用于商品粮食过氧化氢酶活动度的测定。1 仪班和用具恒温水浴锅，电炉;离心机或吸滤装置，锥形瓶:1 0 0 M I r量筒:1
2、 0,1 5 m 1;移液管:5,1 0,2 0 m 1 i研钵，滴定管、细口 瓶、漏斗等。.，.曰月，合目.心.口.j.月.:;2 试荆2.12。22。32.43%过氧化氢溶液;1 0%硫酸溶液，o.i N 高锰酸钾溶液，取3 0%过氧化氢溶液3 m 1 加水稀释至3 0 m 卜p H 7.7 索伦逊磷酸盐缓冲液:甲 液，称取 磷酸氢二 钠1 1.8 7 6 8 溶 于1 1 水中。乙 液，称取磷酸二氢钾9.0 7 8 8 溶于 1 l 水中。临用时，甲、乙液按9:1 混合。2.5 石英砂或用干净的玻瑞片研制成的细砂。吕 操作方法 3.1 过氧化氢酶的提取:称取试样(能换 算成无水试样1 g
3、)，放入研钵中，加少量细砂，量取缓冲液5 0 m 1，先倒出5-1 0 m l 于研钵中 研磨试样，然后经漏斗倒入锥形瓶中，用剩余的缓冲液洗净研钵和漏斗，再把洗液倒入锥形瓶内，振摇后静置2-3 h，用吸滤法或离心沉淀法获得透明的提取液。3.2 酶活动度的测定:摇匀提取液，吸取2 0 m l 注入锥形瓶中，加入2 0 m 1 水和3 m 1 3%过氧化氢溶液，在室温下放置1 5-3 0 m i n，加入5 m 1 1 0%硫酸溶液，摇匀，用。.1 N 高锰酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，记下用去的高锰酸钾溶液毫升数(VO。3.3 对照试验:吸取2 0 m 1 提取液注入锥形瓶中，置于沸水浴中 加热5
4、 m i n，或用直接煮沸法破坏过氧化氢酶。加2 0。工 水和3 m 1 3%过氧化氢溶液于锥形瓶中，在室温下放置1 5-3 0 m i n，再加入1 0%硫酸5 m 1，摇匀，用0.1 N 高锰酸钾溶液滴定，记下用去的毫升数(Y P)。国家标准局，9 8 5-1 1-0 2 发布1 8 8 8-0 T-0 1 实施GB 5 5 2 2-8 5A 结果计算 过氧化氢酶活动度按下列公式计算:过氧化氢酶活动度(m g Hi Oz/比试样)=(V 一 V,)x N x 1 7 x 器式中:V,-酶活动度测定时所用的。.1 N高锰酸钾溶液体积，M),V 对照试验时用去的O.1 N高锰酸钾溶液体积，m 场 N 高锰酸钾溶液当量浓度;1 7-H z O:的毫克当量。双试验结果允许差不超过平均值的1 0%，取平均值为测定结果。测定结果取小数点后第一位。附加说明:本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由商业部粮食储运局负责起草。本标准主要起草人高修吾、杨浩然、吴艳霞、吕桂芬。
