1、ICS 11.220CCS B 42团体标准T/JAASS 10-2021猪瘟活疫苗耐热保护剂质量检验规程Inspecting regulation of heat-resistant protective agent for live swine fevervaccine20210817 发布20210817 实施江苏省农学会江苏省农学会发 布全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/JAASS 10-2021I目次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 通用要求.15 主要检测质量要求.16 猪瘟活疫苗耐热保护剂质量检验操作规程.16.1 耐热保护剂配制.16.
2、2 猪瘟活疫苗耐热保护剂 pH 值检验.26.3 猪瘟活疫苗耐热保护剂内毒素检验.26.4 猪瘟活疫苗耐热保护剂热稳定性检验.27 检验规则.27.1 出厂检验项目.27.2 产品批次.27.3 产品检验.27.4 检验结果的判定.28 贮存.3附录 A（资料性）猪瘟活疫苗耐热保护剂检测项目指标说明及检测注意事项.4A.1 性状.4A.2 pH 值的测定.4A.3 细菌内毒素的测定.4A.4 猪瘟活疫苗病毒含量的检验.6参考文献.9全国团体标准信息平台T/JAASS 10-2021II前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则给出的规则编
3、写。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省农业科学院提出。本文件由江苏省农学会归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院。本文件主要起草人：吕芳、左晓昕、赵艳红、卢宇、邓碧华。全国团体标准信息平台T/JAASS 10-20211猪瘟活疫苗耐热保护剂质量检验规程1范围本文件适用于猪瘟活疫苗耐热保护剂质量标准的检验。本文件规定了猪瘟活疫苗耐热保护剂的质量标准、检验规则、检验方法和操作规程等要求。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4通用要求除非另有说明，在本文件中涉及的所有试剂均为分析纯。5主要检测质量
4、要求猪瘟活疫苗耐热保护剂应符合表1所示的技术要求。表 1 具体检测指标要求项目参考值物理性状固体粉末溶液 pH 值（每升表示量/L）7.07.5细菌内毒素/（EU/mL）50热稳定性检验45C 保存 3 天或 37C 保存 10 天，以放置前后每毫升猪瘟疫苗的病毒含量耐热损失不超过 1 个滴度判为合格。6猪瘟活疫苗耐热保护剂质量检验操作规程6.1耐热保护剂配制每升标示量猪瘟活疫苗耐热保护剂根据不同灭菌方法分为 A 部分和 B 部分，其配制方法如下所示。全国团体标准信息平台T/JAASS 10-20212a）将 A 部分用注射用水加热溶解至指定体积（用 2 mol/L KOH 或 2 mol/L
5、 NaOH 调 pH 至 7.07.5），110C 高压灭菌 20 min。b）将 B 部分用注射用水充分溶解至指定体积（2 mol/L KOH 或 2 mol/L NaOH 调 pH 至 7.07.5），0.22 m 过滤除菌。c）将灭菌后的A部分与B部分按一定比例充分混匀，按中华人民共和国药典2020年版三部通则0631进行pH值检验（应在7.07.5）。6.2猪瘟活疫苗耐热保护剂 pH 值检验按中华人民共和国药典 2020 年版三部通则 0631 pH 值测定法进行，详见附录 A.3。6.3猪瘟活疫苗耐热保护剂内毒素检验按中华人民共和国药典 2020 年版三部通则 1143 细菌内毒素检
6、查法进行，应不超过 50 EU/mL，详见附录 A.3。6.4猪瘟活疫苗耐热保护剂热稳定性检验6.4.1猪瘟活疫苗的配制与冻干将猪瘟弱毒抗原液与猪瘟活疫苗耐热保护剂按一定体积混合均匀、定量分装，按照冻干曲线冷冻干燥后，压盖出舱保存。6.4.2猪瘟活疫苗耐热保护剂热稳定性检验取冻干好的猪瘟活疫苗 5 瓶，置于 45C 保存 3 天或 37C 保存 10 天后，任取 3 瓶测定病毒含量。以放置前后每毫升猪瘟疫苗的病毒含量耐热损失不超过 1 个滴度判为合格。具体检测方法详见附录 A.4 猪瘟活疫苗耐热保护剂病毒含量的检验。7检验规则7.1出厂检验项目均为表 1 技术要求中的所有项目。7.2产品批次同
7、一日期生产的产品为 1 批，每批需检验。7.3产品检验每批次产品均需留样，粘贴标签，注明生产企业名称、产品名称、批号、生产日期，留样日期和留样姓名，由生产企业的质量检验部门进行检验。生产企业应保证出厂的产品均符合本标准要求，每批出厂的产品都应附有一定格式的质量证明书，其内容包括：生产企业名称和地址、产品名称、批号、生产日期和本标准编号等。7.4检验结果的判定全国团体标准信息平台T/JAASS 10-20213留样产品检验结果如果有一项指标不符合本标准要求时，则整批产品为不合格。8贮存产品需在 28C 库房贮存，仓库环境清洁。在以上贮存条件下，自生产日期起产品有效期为 6 个月。耐热保护剂配制成
8、液体后，28C 储存，有效期为 3 个月。全国团体标准信息平台T/JAASS 10-20214附录A（资料性）猪瘟活疫苗耐热保护剂检测项目指标说明及检测注意事项A.1 性状目测法检测。A.2 pH 值的测定A.2.1 仪器设备与耗材pH计（FiveEasyPlus台式pH计）、烧杯、玻璃棒、pH计校正液（4.01、6.86、9.18）A.2.2 操作方法A.2.2.1 猪瘟活疫苗耐热保护剂配制每升标示量的A部分用注射用水加热溶解并定容至指定体积。每升标示量的B部分用注射用水充分溶解（2530C）并定容至指定体积。待猪瘟活疫苗耐热保护剂A部分和B部分温度回到室温，分别进行pH值检测。A.2.2.
9、2 pH 计校正pH计电极和温度补偿电极与主机连接，用pH计校正液进行三点校正。用蒸馏水冲洗电极，用吸水纸吸干水分，将电极插入校正液（4.01），点击“校准”进行第一次校正。用蒸馏水冲洗电极，用吸水纸吸干水分，将电极插入校正液（6.86），点击“校准”进行第二次校正。用蒸馏水冲洗电极，用吸水纸吸干水分，将电极插入校正液（9.18），点击“校准”进行第三次校正。然后自动回到pH测量模式，用蒸馏水冲洗，检待测样品。A.2.2.3 pH 值测量将pH计用蒸馏水冲洗干净，用吸水纸吸干剩余水分后，将电极插入被测溶液中，快速搅拌晃动以排除电极内的气泡，静置，点击“测量”，所显示数据为该样品的pH值。A.3
10、 细菌内毒素的测定A.3.1 仪器设备与耗材鲎试剂、细菌内毒素标准品、细菌内毒素检测用水、反应试管、无内毒素吸头、移液器、恒温箱、漩涡混合器、试管架、计时器。全国团体标准信息平台T/JAASS 10-20215A.3.2 细菌内毒素检测操作方法A.3.2.1 猪瘟活疫苗耐热保护剂配制每升标示量的A部分用注射用水加热溶解并定容至指定体积。用2 mol/L KOH或NaOH调pH至7.07.5，110C高压灭菌20 min。每升标示量的B部分用注射用水充分溶解（2530C）并定容至指定体积。用2 mol/L KOH或NaOH调pH至7.07.5，0.22 m滤膜过滤除菌。将灭菌的A部分与B部分充分
11、混匀后，28C储存备用。A.3.2.2 内毒素标准品稀释稀释内毒素标准品时应按使用说明要求，加入细菌内毒素检测用水，用漩涡混合器混合，使其充分溶解，制成原液，用这一原液制作合适的系列稀释。用前，用旋转搅拌器强力搅拌至少3 min，每一步稀释，至少搅拌30 s，然后才能用它稀释下一步。经稀释的参考内毒素不得贮存待以后使用，因为吸附作用会使其失去活性。A.3.2.3 供试品稀释当供试品需要控制的内毒素限值大于鲎试剂的灵敏度值时，需要用检查用水对供试品进行稀释，确定最大有效稀释倍数（MVD）。最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。
12、计算公式：MVD=cL/（A.1）其中：L：供试品需控制的细菌内毒素限值（EU/mL）；：为凝胶法鲎试剂的标示灵敏度（EU/mL）；c：为供试品溶液的浓度。当L以EU/mL表示时则c=1.0 mL/mL，当L以EU/mg或EU/U表示时，则c的单位需要为mg/mL或U/mL。如供试品为注射用无菌粉末或原料药时，则MVD取1，可计算供试品的最小有效浓度：c=/L。A.3.2.4 检查操作A.3.2.4.1 使用0.1 mL规格的鲎试剂时的操作a）取鲎试剂8支，其中2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照，2支作供试品检查管；b）阴性对照管加入0.2 mL检查用水，其余各管加入0.
13、1 mL检查用水；阳性对照管加入0.1 mL浓度为2 的内毒素溶液；每支供试检查管另加入0.1 mL供试品；供试品阳性对照管加入0.1 mL含2 内毒素供试品；c）封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入371C恒温器中孵育602 min，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何振动。A.3.2.4.2 使用其它规格的鲎试剂时的操作a）取鲎试剂若干支，按照使用说明加入检查用水溶解，轻轻摇匀备用；全国团体标准信息平台T/JAASS 10-20216b）取1075 mm试管8支，其中2支作供试品检查管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管；c）每支试管加入0.1 mL已溶解的鲎试剂；d
14、）每支供试品检查管加入0.1 mL供试品；阴性对照管加入0.1 mL检查用水；阳性对照管加入0.1 mL浓度为2 的内毒素溶液；检品阳性对照管加入0.1 mL含2 内毒素供试品；e）封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入371C恒温器中孵育602 min，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何振动。A.3.2.5 结果判断将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180时，若管内形成结实的凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记（+）号；不形成凝胶或形成的凝胶不结实、变形并从管壁滑脱者，则判为阴性，记（-）号。拿取试管时，要轻拿轻放，避免不必要的碰撞，而出现假阴性结果。阴性对照管必须是阴性，阳性对照管
15、、供试品阳性对照管必须是阳性，否则试验应判为无效。A.3.2.6 注意事项鲎试剂的灵敏度应经过确证试验中使用的所有容器和用具，都必须进行灭菌，用足够的时间进行加热处理、破坏这些用具表面上可能存在的外源性内毒素。内毒素试验的结果是否可靠，还必须从试验使用的各种用具、溶液、洗涤用品中取样或提取样品，并用适当的方法证明它们对反应没有抑制或拉强或其它干扰作用。可按下述方法进行抑制试验或增强试验。试验中应设置阴性对照。如果鲎试剂的原材料、生产方法或处方发生改变时都要重新进行试验。A.4 猪瘟活疫苗病毒含量的检验A.4.1 检验说明猪瘟活疫苗病毒含量的检验，在“用兔检验，用猪检验或用猪瘟病毒间接免疫荧光法
16、检验”三种方法中，可任选其一进行猪瘟活疫苗病毒含量的检测。A.4.2 检验方法A.4.2.1 用兔检验A.4.2.1.1 实验兔的选择选用体重1.53.0 kg健康家兔，接种前至少测温观察3日，基础体温应在38.5C39.5C，并且温差波动不超过0.5C。A.4.2.1.2 冻干后猪瘟疫苗病毒含量的确定根据冻干前猪瘟活疫苗半成品RID效价情况，准确测定冻干后猪瘟活疫苗的病毒含量，即每毫升中所含兔体感染量RID。A.4.2.1.3 热稳定性实验后猪瘟疫苗病毒含量的确定全国团体标准信息平台T/JAASS 10-20217根据冻干后猪瘟活疫苗的实测病毒含量，按降低1个滴度作为热稳定性实验后猪瘟疫苗的稀释浓度。例如冻干后猪瘟活疫苗病毒含量为5105RID/mL，则热稳定性试验后猪瘟疫苗所含病毒含量不得低于5104RID/mL。A.4.2.1.4 猪瘟疫苗的稀释和RID检测方法每瓶疫苗用灭菌生理盐水复溶至冻干前原体积，再稀释至A.4.1.2和A.4.1.3所明确的冻干后及热稳定性试验后猪瘟疫苗病毒含量稀释度预估值，耳静脉注射1.53.0 kg兔至少2只，各1.0 mL，接种后，上、下午各测体温一
