1、 ICS 67.060 X 11 备案号：38348-2013 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 18482013 人参及其制品中嘧菌酯等 11 种农药残留量的检测方法 The Method of Determining Azoxystrobin and 11 others Pesticide Residues in Ginsengs and its Productions 2013-07-22 发布 2013-09-01 实施吉林省质量技术监督局 发 布 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用
2、 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 18482013 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局技术中心、中华人民共和国通化出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王明泰、牟峻、李爱军、赵庆松、牛茜、史晓丽、赵巍巍、胡婷婷。本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得
3、翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 18482013 1 人参及其制品中嘧菌酯等 11 种农药残留量检测方法 1 范围 本标准规定了人参及其制品中嘧菌酯、嘧菌环胺、氟硅唑、苯醚甲环唑、氟菌唑、醚菌酯、烯酰吗啉、甲霜灵、嘧霉胺、咯菌腈和噁霉灵残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准规定了人参及其制品中嘧菌环胺、氟硅唑、氟菌唑、烯酰吗啉、甲霜灵、咯菌腈残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于鲜人参、生晒参、红参、活性参、人参蜜片、人参丁香茶、人参提取物中嘧菌酯、嘧菌环胺、氟硅唑、苯醚甲环唑、氟菌唑、醚菌酯、烯酰吗啉、甲霜灵、嘧霉胺、咯菌腈和噁霉灵残留量的
4、测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法。第一法 液相色谱-质谱/质谱法 3 原理 液相色谱-质谱/质谱法：试样（除噁霉灵外）用丙酮提取，高速离心机离心，经复合固相萃取小柱净化，供液相色谱-质谱/质谱仪测定和确证，外标法定量。噁霉灵用乙腈提取、高速离心机离心，经C18固相萃取小柱净化，供液相色谱-质谱/质谱仪测定和确证，外标法定量。4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规
5、定的一级水。4.1 乙腈（CH3CN）：残留级。4.2 正己烷（CH3(CH2)4CH3）：残留级。4.3 乙酸乙酯（C4H8O2）：残留级。4.4 甲苯（C7H8）：色谱纯。4.5 丙酮（C3H6O）：色谱纯。4.6 甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.7 乙酸乙酯-正己烷（1+1）：量取 50 mL 乙酸乙酯和 50mL 正己烷，混匀。4.8 乙腈-甲苯（3+1）：量取 150 mL 乙腈和 50mL 甲苯，混匀。4.9 农药标准品：嘧菌环胺（Cyprodinil，CAS NO.121552-61-2）（CAS 号 108-78-1，纯度大于等于98.0%）、氟硅唑（Flusilazole，C
6、AS NO.85509-19-9，纯度大于等于 98.0%）、苯醚甲环唑本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 18482013 2（difenoconazole，CAS NO.119446-68-3，纯度大于等于 98.0%）、嘧菌酯（Azoxystrobin，CAS NO.131860-33-8，纯度大于等于 98.0%）、氟菌唑（Triflumizole，CAS NO.68694-11-1，纯度大于等于 98.0%）、醚菌酯（propiconazole，CAS NO.60207-90-1，纯度大于等于
7、98.0%）、烯酰吗啉（Dimethomorph，CAS NO.110488-70-5，纯度大于等于 98.0%）、甲霜灵（metalaxyl，CAS NO.57837-19-1，纯度大于等于98.0%）、嘧霉胺（Pyrimethanil，CAS NO.53112-28-0，纯度大于等于 98.0%）、咯菌腈（Fludioxonil，CAS NO.53112-28-0，纯度大于等于 98.0%）噁霉灵（hymexazol，CAS NO.10004-44-1，纯度大于等于 98.0%）。参见附录 A。4.10 标准溶液 4.10.1 标准储备液：分别准确称取上述 11 种农药标准品 10 mg(
8、精确至 0.1 mg)，分别置于 100.0 mL容量瓶中，用丙酮溶解，并定容配制成浓度 100 g/mL 的标准储备液。该溶液分别储备于棕色容量瓶中，在 0 4 保存 12 个月，咯菌腈 0 4 保存 6 个月。4.10.2 标准混合工作溶液：用移液管准确移取标准贮备溶液，根据需要用乙腈稀释、定容，配制工作标准溶液，现用现配。4.10.3 噁霉灵标准工作溶液：用移液管准确移取标准贮备溶液，根据需要用空白人参提取液稀释、定容，配制工作标准溶液，现用现配。5 仪器设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：API 4000 色谱，质谱联用仪，配有电喷雾离子源（ESI）。5.2 涡旋混合器。5.3 高速
9、离心机：10 000 r/min。5.4 旋转蒸发仪。5.5 天平：感量为 0.01 g 和 0.0001 g。5.6 浓缩瓶：50 mL，250 mL。5.7 氮吹仪。5.8 固相萃取柱：（ENVI-Carb，PSA，C18），1500 mg，12 mL 或相当者，使用前，用 10 mL 乙腈-甲苯（3+1）活化。5.9 C18柱，10 mL 或相当者，使用前，用 10 mL 乙腈:甲苯（3:1）活化。5.10 有机相微孔滤膜：0.22 m。6 试样的制备 6.1 生晒参、红参、活性参：取适量样品，用粉碎机粉碎，过 0.25mm 筛，混匀，装入洁净容器，密封，于-20保存。6.2 鲜参：取不
10、少于 200g 样品，置于组织捣碎机中捣碎、混匀，装入洁净容器，密封，于-20保存。6.3 人参蜜片、人参丁香茶、人参提取物：取适量样品、用粉碎机粉碎，过 0.25mm 筛，混匀，装入洁净容器，密封，于-20保存。注：在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 分析步骤 7.1 试料的称量 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 18482013 3 称取鲜参样品10 g（精确至0.01g）于100mL离心管中，其它样品1 g（精确至0.001g）于50mL离心管中。7.2 试料的
11、测定 7.2.1 提取 7.2.1.1 嘧菌酯、嘧菌环胺、氟硅唑、苯醚甲环唑、氟菌唑、醚菌酯、烯酰吗啉、甲霜灵、嘧霉胺、咯菌腈：取称量好的试料，加入丙酮 20 mL，高速匀浆 1 min 后,以 8000 rpm 离心 5 min，取上清液，移至浓缩瓶中，再向残渣中加入 20 mL 丙酮，重复提取一次，合并上清液，于 35 下旋转浓缩至近干，加入乙腈-甲苯（3+1）5 mL 溶解残渣，待净化。7.2.1.2 噁霉灵：取称量好的试料，加入乙腈 20 mL，高速匀浆 1 min 后,以 8000 rpm 离心 5 min，取上清液，移至浓缩瓶中，再向残渣中加入 20 mL 丙酮，重复提取一次，合并
12、上清液，于 35 下旋转浓缩至近干，加入乙腈-甲苯（3+1）5 mL 溶解残渣，待净化。7.2.2 净化 7.2.2.1 嘧菌酯、嘧菌环胺、氟硅唑、苯醚甲环唑、氟菌唑、醚菌酯、烯酰吗啉、甲霜灵、嘧霉胺、咯菌腈:用 10 mL 乙腈-甲苯（3+1）预淋洗固相萃取柱(5.8)，流出液弃去。将 5 mL 提取液（7.2.1.1）倾入固相萃取柱中，用 20 mL 乙腈-甲苯（3+1）进行洗脱。收集全部洗脱液于 250mL 浓缩瓶中，于 35 水浴中旋转浓缩至近干。用乙腈溶解，并定容至 1 mL，经 0.22 m 滤膜过滤后供液相色谱-质谱/质谱测定。7.2.2.2 噁霉灵：用 10 mL 乙腈-甲苯（
13、3+1）预淋洗 C18 固相萃取柱（5.9），弃去流出液。将 5 mL提取液（7.2.1.2）倾入 C18 柱固相萃取柱中，用 20 mL 乙腈-甲苯（3+1）进行洗脱。收集全部洗脱液于浓缩瓶中，于 35 水浴中旋转浓缩至近干。用乙腈溶解，并定容至 1 mL，经 0.22 m 滤膜过滤后供液相色谱-质谱/质谱测定。7.2.3 测定 7.2.3.1 色谱参考条件 a)色谱柱：Kromasil Eternity-5-C18，2.1 mm150 mm 或相当者；b)流动相及流速见表 1 c)色谱柱柱温度：40；表1 流动相及流速选择 步骤 总时间 min 流速（l/min）0.1%甲酸水（%）乙腈（
14、%）1 0 250 50 50 2 8 250 10 90 3 12 250 10 90 4 12.1 250 50 50 5 18 250 50 50 7.2.3.2 质谱参考条件 参见附录B 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 18482013 4 注：由于测试结果取决于所使用仪器，因此不可能给出液相色谱-质谱/质谱分析的通用参数。设定的参数应保证色谱测定时被测组分与其它组分能够得到有效的分离，表1和附录B给出的参数证明是可行的。7.2.3.3 定性测定 按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作
15、溶液，样品的质量色谱峰保留时间与标准品中对应的保留时间偏差在2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与接近浓度的标准工作溶液中相应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2 规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。对混合标准溶液及样液按上述规定的条件进行测定时，如果样液与混合标准溶液的选择离子图中，在相同保留时间有峰出现，则根据定性选择离子的种类及其丰度比对其进行阳性确证。表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/%50 20至50 10至20 10 允许的相对偏差/%20 25 30 50 7.2.3.4 定量测定 根据试样中被测样液中目标物的含量情况，选取响应值
16、相近的标准工作液进行分析，对于高浓度样品须适当进行系列稀释。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，外标法定量。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录E中图E.1。7.3 空白试验 除不称取试料外，按上述步骤同步进行。8 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中每种农药残留含量：mAVcAXisiii=.(1)式中：Xi 试样中农药 i 残留量，单位为微克每克（g/g）；Ai 样液中农药 i 的峰面积（或峰高）；Ais标准工作液中农药 i 的峰面积（或峰高）；ci 标准工作液中农药 i 的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m 试料的质量，单位为克（g）。注：计算结果表示到小数点后2位，计算结果应扣除空白值 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 18482013 5 第二法 高效液相色谱法 9 原理 高效液相色谱法：试样用正己烷饱和的乙腈提取，正己烷液液分配，乙腈收集液浓缩到合适体积，用串联的GPR和氟罗里硅土固相萃取小柱净化，洗
